動(dòng)物細胞擴大培養

關(guān)于動(dòng)物細胞擴大培養的科研文獻分析  液氮罐

1.該實(shí)驗研究的目的或意義

利用動(dòng)物細胞培養可以生產(chǎn)具有重要醫用價(jià)值的酶、生長(cháng)因子、疫苗和單抗等，已成為醫藥生物高技術(shù)產(chǎn)業(yè)的重要部分，利用動(dòng)物細胞培養技術(shù)生產(chǎn)的生物制品已占生物高技術(shù)產(chǎn)品*的50%，為了培養規模的進(jìn)一步擴大、優(yōu)化細胞培養環(huán)境、提高產(chǎn)品的產(chǎn)出率與保證其質(zhì)量，動(dòng)物細胞大規模培養技術(shù)已成為各生產(chǎn)企業(yè)發(fā)展至關(guān)重要的環(huán)節。

2.為達到該目的采用的什么方法

根據動(dòng)物細胞的類(lèi)型和培養特性，大規模培養可采用貼壁培養、懸浮培養和固定化培養等三種培養方法進(jìn)行培養。

3.陳述該研究的結果

①貼壁培養：優(yōu)點(diǎn)：(1) 細胞緊密黏附于固相表面，可直接傾去舊培養液，清洗后直接加入新培養液，容易更換培養液;

(2) 因細胞固定載體表面，不需過(guò)濾系統，容易采用灌注方式培養，從而達到提高細胞密度的目的;

(3) 當細胞貼壁于生長(cháng)基質(zhì)時(shí)，細胞將更有效的表達一種產(chǎn)品;

(4) 同一設備可培養多種細胞，并根據需要采用不同的培養液和細胞的比例。

缺點(diǎn)：(1) 細胞繁殖貼壁后不易消化下來(lái)，培養的擴大比較困難;

(2) 培養設施占地面積大，設備投資大;液氮罐

(3) 采用細胞反應器培養，細胞無(wú)法進(jìn)行顯微鏡觀(guān)察，不能有效監測細胞的生長(cháng)狀態(tài);

(4) 在測定和控制細胞所處環(huán)境的*均勻化方面比較困難。

②懸浮培養：優(yōu)點(diǎn)：(1) 操作簡(jiǎn)單、培養條件均一、便于進(jìn)行定量研究;

(2) 傳質(zhì)和傳氧比較好，有利于細胞與培基中的營(yíng)養物質(zhì)和氣體充分接觸，而且易于控制培養條件(溫度、pH、氧分壓和CO2等);

(3) 它們在離體培養時(shí)不需要附著(zhù)物，只需懸浮于培養液中就可以良好生長(cháng);

(4) 懸浮培養法細胞增殖快，產(chǎn)量高，設備結構簡(jiǎn)單;

(5) 細胞傳代時(shí)不需要再分散，只需按比例稀釋即可繼續培養?？山梃b細菌發(fā)酵的經(jīng)驗，容易擴大培養規模，可連續擴大生產(chǎn)量;

(6) 易于在連續密閉的系統中進(jìn)行，減少了操作步驟和污染的機會(huì )。

③固定化培養：吸附法、包埋法、共價(jià)貼附法、微囊法、離子/共價(jià)交聯(lián)法

4.該實(shí)驗的創(chuàng )新點(diǎn)及不足

該實(shí)驗的方法創(chuàng )新點(diǎn)在于方法較為全面，優(yōu)缺點(diǎn)分明，不足之處在于方法比較通用，沒(méi)有什么特別亮點(diǎn)的培養方法。

5.你在改實(shí)驗基礎上繼續研究的設計思路

既然大規模培養了細胞，如何能保存細胞也是一個(gè)問(wèn)題，所以我想從保存細胞方面繼續設計研究。大概的試驗方法如下：

①.挑選細胞：選擇生長(cháng)旺盛期, 細胞界限清楚, 立體感強, 形態(tài)良好的細胞。

②.消化細胞： 按細胞的常規消化方法用胰酶EDTA消化分散, 加入5~10ml.營(yíng)養液(不含

血清), 以1000r/min,離心20分鐘，棄上清。

③.凍存懸液的制備： 將離心后沉淀的細胞收集起來(lái), 加入適量?jì)龃嬉? 輕輕吹打數次, 制成細胞懸液。

④.分裝封口： 將上述懸液分裝于安瓶?jì)? 每支安靚裝1 毫升, 火焰封口, 貼好標記, 裝入紗布袋中。

⑤.梯度降溫： 將嚴密封口加注標記的細胞安瓶置=4℃ 冰箱3~4小時(shí), 然后放入氣態(tài)冷凍30分鐘，使其降至-70℃以下，再直接浸入液氮中凍存。

⑥.復蘇培養：復蘇細胞時(shí), 從液氮罐中取出安瓶, 迅速置入37~40℃水浴中, 并適當搖勻, 使其在1分鐘內融化*。在無(wú)菌條件下打開(kāi)安瓶,將細胞懸液移入培養瓶中,1ml細胞懸液加20ml培養液, 然后放入37℃ 培養箱中培養, 次日更培養1次。

⑦.觀(guān)察結果：觀(guān)察復蘇培養的細胞的生民貼壁狀態(tài)、細胞生長(cháng)繁殖速度和細胞傳代能力。如果細胞貼壁良好, 仍能繼續傳代下去, 其生長(cháng)速度與凍前比較無(wú)明顯差異, 則可認為凍存結果比較滿(mǎn)意。液氮罐